本发明公开了鞘磷脂酶突变体及其在sdLDL胆固醇检测中的应用,属于脂类含量检测技术领域。具体涉及五种鞘磷脂酶突变体:鞘磷脂酶突变体D118Q,鞘磷脂酶突变体N122D,鞘磷脂酶突变体N333E,鞘磷脂酶突变体Q376Y,鞘磷脂酶突变体MUT,其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:2~6所示所述鞘磷脂酶突变体在sdLDL胆固醇检测中的应用。本发明还公开了五种鞘磷脂酶突变体的编码基因,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:8~12所示。本发明的五种鞘磷脂酶突变体,与野生型鞘磷脂酶相比,活性更高,提高了2~3倍,用于sdLDL胆固醇检测时,所使用的活力单位更少,效率更高。
本发明公开了一种海洋链霉菌磷脂酶D突变体和应用,所述的磷脂酶D突变体是在氨基酸序列为SEQ ID NO:1的基础上单点突变380位点氨基酸所得。本发明磷脂酶D突变体酶活力显著提高,实验测定突变体1(S380A)的酶活力是野生型的2.4倍,突变体2(S380F)的酶活力是野生型的1.1倍,突变体3(S380V)的酶活力是野生型的2.6倍,突变体4(S380M)的酶活力是野生型的1.2倍,突变体5(S380L)的酶活力是野生型的1.6倍。同时,本发明突变体的催化效率也显著提高,酶活力和催化性能的改善进一步提升了该酶的工业利用价值。
本发明公开了一种烯还原酶突变体及其编码基因和应用。一种烯还原酶突变体基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。一种烯还原酶突变体基因,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。一种烯还原酶突变体的制备方法,包括如下步骤:培养烯还原酶突变体的基因工程菌,获得重组的烯还原酶突变体。本发明提供一种催化活性高、热稳定性好的烯还原酶突变体及其编码基因和应用。
本发明涉及一种热稳定性和比活力提高的低温β‑木糖苷酶突变体,所述突变体为低温β‑木糖苷酶突变体G110S,其氨基酸序列为SEQ ID NO.1;或者,所述突变体为低温β‑木糖苷酶突变体Q201R,其氨基酸序列为SEQ ID NO.2;或者,所述突变体为低温β‑木糖苷酶突变体loop2,其氨基酸序列如SEQ ID NO.3。本发明中稳定性提高和比活力上升的低温β‑木糖苷酶突变体更适合工业应用,在食品、饲料、造纸等领域具有更广泛的应用前景,从而扩大了低温β‑木糖苷酶在食品、医药、造纸、饲料等领域提供了应用潜力。
本发明公开了I型普鲁兰酶的突变体酶,突变体酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明还公开了编码所述突变体酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明还公开了突变体酶的制备方法,包括根据I型普鲁兰酶的氨基酸序列进行同源建模,基于序列比对分析和蛋白结构分析,选取突变位点并设计对突变引物对;以携带I型普鲁兰酶基因的载体为模板,分别进行定点突变反应,得到突变质粒;于突变质粒转化工程菌中复制表达对应的突变体酶。本发明的突变体酶具有更优的耐热性能和比酶活。